細胞計數片是一種常用的細胞計數工具,醫學(xué)上常用來(lái)計數紅細胞、白細胞等而得名,也常用于計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數量,是一種常見(jiàn)的生物學(xué)工具。
細胞計數片的使用說(shuō)明:
(1)充分混勻細胞,將細胞懸液滴加在兩個(gè)細胞入口處。
(2)放在顯微鏡下靜置1-2分鐘等待細胞附著(zhù)在計數板上。
(3)按照A→B→C→D的順序對每個(gè)細胞計數室的細胞進(jìn)行計數后加和。
(關(guān)于網(wǎng)格線(xiàn)上的計數規則清參照下圖以及注釋(2))
(3)細胞密度(CellDensity)通過(guò)以下公式計算得到,N是四個(gè)細胞計數室的
(4)細胞總數.
CellDensity=(N/4)x104cells/mL
(*)對于計數前經(jīng)過(guò)稀釋的細胞懸液,要將上式計算所得的細胞密度乘以稀釋倍數。
注意:
(1)為了將誤差最小化,四個(gè)計數室中的細胞均應被計數.只計數一個(gè)細胞室會(huì )增加誤差的機會(huì ),要取得更加正確的數值可以將細胞加在兩個(gè)細胞入口,并取兩個(gè)N值的平均值。
(2)(邊界線(xiàn)細胞計數規則)細胞計數室上的方格邊線(xiàn)上,細網(wǎng)格線(xiàn)上的細胞應該計數,粗網(wǎng)格線(xiàn)上的細胞則不要計入,例如細胞計數室A。
(3)為了提高計算細胞存活率,操作者應該在染色后20分鐘內完成計數(對于對染色液敏感的細胞應在5分鐘內完成)。細胞在染色液中時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )增加死細胞的數量。
(4)氣泡在細胞計數室中偶爾會(huì )出現,如果加樣后細胞在計數室中停留時(shí)間過(guò)長(cháng),就有可能出現氣泡干擾計數結果。
(5)細胞計數室具有經(jīng)過(guò)預處理的表面,操作者不能重復使用計數板,因為在一次使用后計數室表面特性改變,重復用后會(huì )帶來(lái)不正確的計數結果。
(6)為了儲存沒(méi)有用過(guò)的計數板,操作者應將其放入密封的保險袋中,不要將用過(guò)的塑料板裝進(jìn)原來(lái)的塑料袋中。
(7)在室溫下保存,高溫會(huì )改變計數室表面的特性。
(8)實(shí)驗室專(zhuān)用,非臨床,治療,診斷用途。